Méthodes utilisées dans l'évaluation de la bioactivité de plantes médicinales

Méthodes utilisées dans l'évaluation de la bioactivité de plantes médicinales
Activité antibactérienne
De nombreuses plantes ont été utilisées pour traiter ou prévenir les maladies diarrhéiques et le dépistage du
les extraits de ces plantes pour l'activité antimicrobienne sont relativement simples. En particulier
En particulier, le dépistage de l'activité antibactérienne est effectué à l'aide de tests conventionnels
utilisé pour tester des antibiotiques qui détectent l'inhibition de la croissance bactérienne en liquide ou solide
milieu de croissance [10]. La méthode la plus couramment utilisée pour évaluer les antimicrobiens
L’activité biologique des extraits de plantes est la méthode de diffusion sur gélose. Il est fiable, précis et
peu coûteux, même s’il ne donne que des résultats semi-quantitatifs. Les méthodes
inoculation de la surface d’une gélose avec le microorganisme à tester ou
verser de la gélose fondue inoculée avec l'organisme testé dans une boîte de Pétri. La com-
livre à évaluer peut être appliqué sur un disque de papier ou dans un puits fait dans le
gélose. Après une incubation appropriée, l'apparition de zones d'inhibition de la croissance
autour du disque ou du puits indique une activité antimicrobienne (Fig. 12.1). Le type de moi
dium utilisé, les conditions d’incubation, le diamètre du disque en papier ou du puits,
la nature chimique du composé à tester (taille et polarité), affectera
la diffusibilité de l'agent antimicrobien et donc la taille des zones d'infection
bition qui se développe. Les méthodes de dilution en gélose ou en bouillon peuvent donner des résultats quantitatifs.
en déterminant les indices d’inhibition de la croissance, une concentration inhibitrice minimale
concentrations létales minimales [10].
12.2 Méthodes utilisées pour évaluer la bioactivité de plantes médicinales 249
Activité antiprotozoaire
Le criblage antiprotozoaire a été réalisé en utilisant des méthodes analogues à celles
utilisé pour l'évaluation antibactérienne. En règle générale, Entamoeba histolytica ou Giardia lamblia
les trophozoïtes sont inoculés dans des éprouvettes contenant des extraits de plantes médicinales.
Après incubation, des échantillons de tubes sont prélevés et testés pour la viabilité cellulaire en utilisant
méthodes d’essai d’exclusion du colorant bleu trypan ou du métabolisme du sel de tétrazolium [11, 12].
12.2.3
Activité antihelminthique
Le test de l’activité antihelminthique (nématicide et larvicide) est réalisé par aspiration
évaluer la capacité des extraits de plantes à empêcher l'éclosion et le développement de
oeufs de nématode [13]. Les œufs d' Haemochonus contortus , un nématode de l'immunologie
Portance, sont produits en infectant des moutons par voie orale avec des larves du troisième stade (infectieuses)
et ramasser les œufs dans les matières fécales après trois semaines. Le test des extraits de plantes implique
addition des extraits sur des plaques multipuits, puis recouverte d'agar et de
en ajoutant des milieux de culture pour favoriser la croissance des bactéries qui sont utilisées comme nutriments par
larves libres. Le degré d’éclosion réussie des larves dans des puits contenant des extraits de plantes
le tractus est observé au microscope. Le nombre de nématodes présents et leur réduction
le développement en différents stades larvaires est évalué. L’activité nématicide est élevée
mortalité larvaire totale comprise entre 95 et 100%, activité intermédiaire entre 80 et 95%,
tandis que 60 - 80% de mortalité est considérée comme une faible activité.
12.2.4
Activité antivirale
Les tests de dépistage antiviraux sont compliqués par le fait qu’ils utilisent la culture cellulaire
méthodes. Néanmoins, un certain nombre d'études ont cherché à étudier l'activité
250 12 Plantes traditionnelles et plantes médicinales utilisées dans le traitement des maladies diarrhéiques
Fig. 12.1 Essai de diffusion sur gélose
montrant des zones de croissance bactérienne
inhibition dans l'agar inoculé avec
micro-organisme d'essai. Cette expérience
représente une diffusion plaque-trou
dosage où les extraits de plantes étaient
ajouté aux puits faits dans la gélose.
Photo fournie par J. McRae.
contre ces types d'agents pathogènes. Le test antiviral a pour but de déterminer l’inhibition
cytotoxicité induite par le virus de cellules hôtes appropriées. Monocouches confluentes de
les cellules sont infectées par le virus en combinaison avec diverses concentrations de
extrait de plante et incubé pendant une période appropriée. Le nombre de viables
colorimétriques et la concentration efficace à 50% (CE 50 ) de
extrait est déterminé comme étant la dilution réciproque nécessaire pour prévenir le virus
cytolyse de 50% [5, 14]. Alternativement, la réduction du titre viral (exprimée en
TCID 50 ) peut être déterminé [15] ou l’absence de cytopathogènes visibles au microscope
On observe un effet ic [16]. Une modification des méthodes ci-dessus implique de mesurer
la réduction du nombre de plaques virales formées sur des monocouches de cellules [5]. Pour
déterminer le mode d’activité antivirale, la réduction de la liaison du virus peut être
dit en calculant le pourcentage de virus marqué radioactivement qui se lie à la cellule
monocouches [5].
12.2.5
Activité antidiarrhéique
De nombreuses études sur des animaux ont étudié la bioactivité et les effets sur l'intestin.
nale des plantes traditionnellement utilisées pour le traitement de la diarrhée
Un agent étiologique est identifié. Ces extraits de plantes peuvent avoir des effets antispasmodiques.
retarder le transit gastro-intestinal, supprimer la motilité de l’intestin, stimuler l’adsorption d’eau
tion, ou réduire la sécrétion d'électrolyte. Ces activités, associées à des traitements antimicrobiens
peut aider à expliquer les avantages de l’utilisation de plantes particulières dans le traitement
des maladies diarrhéiques. Pour déterminer l'activité antidiarrhéique d'un extrait, la diarrhée
est induite par un agent tel que l'huile de ricin, l'acide arachidonique, la prostaglandine E 2 ou
sulfate de magnésium et la capacité de l’extrait faisant l’objet de la recherche à conférer
La détection est déterminée en mesurant le débit fécal. Comme ces agents ont différents
mécanismes d’action (par exemple, l’huile de ricin augmente l’activité péristaltique et
la perméabilité de la muqueuse intestinale à l’eau et aux électrolytes, tout en
le sulfate de nésium est un agent actif osmotique), la nature de l'activité antidiarrhéique
peut être déterminé [17, 18].
Le transit gastro-intestinal est généralement déterminé en mesurant le transit d’un carcinome
bouchon de charbon (une suspension à 5% de charbon de bois dans une solution aqueuse à 10% de poudre de gomme adragante).
administré par voie orale). La distance parcourue par la fiche est exprimée sous forme de
centage de la longueur totale de l'intestin grêle [18 - 20]. L'effet sur la motilité de l'intestin
est déterminée en mesurant la capacité d'un extrait à bloquer les contractions évoquées par
agonistes (par exemple acétylcholine, histamine et nicotine) [19, 21]. La capacité d'un ex-
test pour stimuler l’adsorption d’eau ou réduire la sécrétion d’électrolyte est mesuré
réalisation de tests de la boucle intestinale ou du côlon ligaturé [6, 18]. Dans ces expériences, des sections de
l'intestin sont ligaturés et des extraits de plantes sont introduits dans les sections isolées. Au
à la fin de la période expérimentale, le contenu de l’intestin ligaturé est évalué (par
mesurer la quantité de fluide accumulée et la concentration en Na + , K + et
Ions Cl - ) et l'absorption nette d'eau et d'électrolytes avec et sans extrait
est déterminé. Pour la détermination de la bioactivité spécifique, les sections peuvent également être
traités avec un agent connu pour provoquer une accumulation de fluide et une sécrétion d'électrolyte.
12.2 Méthodes utilisées pour évaluer la bioactivité de plantes médicinales 251
intestinale, telle que la toxine cholérique, pour déterminer si l'extrait peut
inhiber les effets de ces agents.