Méthodes de test de l'activité antimicrobienne des extraits
Résumé
L’utilisation d’extraits de plantes en tant qu’agents thérapeutiques suscite un intérêt croissant.
en particulier, la capacité de ces extraits à inhiber la croissance de micro-organismes pathogènes.
ganismes. Dans ce chapitre, les principales méthodes d’ évaluation in vitro des antimicrobiens
l'activité crobienne sont discutées et les forces et les limites de chaque méthode
a souligné. Méthodes d’évaluation des propriétés antibactériennes, antifongiques, antivirales et
antiparasitaires sont discutés avec des questions clés illustrées par la référence à la littérature
la température. L’objectif est de donner un aperçu des méthodes disponibles et de permettre à la
lecteur de choisir la méthode qui convient le mieux à leurs besoins.
Au cours de la dernière décennie, il y a eu une explosion d’intérêt pour les antimicrobiens,
en particulier antibactérien et antifongique, activité de produits naturels [1 - 5]. C'est
motivés par un certain nombre de facteurs, notamment l’augmentation de la résistance aux antibiotiques et la crainte de
développement encore plus infectieux « superbactéries, » l'impact des diseas- infectieux
sur la mortalité et la morbidité, et un intérêt croissant pour les thérapies « naturelles » et une
passer à plus de soins personnels. Les communautés traditionnelles souhaitent également conserver leur appartenance ethnique et ethnique.
patrimoine armacologique et exploration de traitements traditionnels pour une variété de
Facilité a le potentiel d'autonomiser ces communautés et d'améliorer à la fois leur
santé et économie. Ceci est particulièrement important dans les pays en développement où
l'utilisation d'antibiotiques conventionnels peut être limitée en raison de coûts ou d'autres facteurs. Dans
En outre, ces communautés ont souvent une riche tradition d'utilisation d'herbes et d'autres
produits végétaux pour les infections endémiques; cela sert de point de départ pour la recherche
intéressés à trouver des traitements pour ces maladies.
Recommandations pour l’utilisation de divers produits naturels (p. Ex. Huiles essentielles,
miel, extraits de plantes) pour les maladies infectieuses est répandu et apparaît dans
nombre de textes populaires et d’autres textes faciles à obtenir [6 - 10]. Cependant, malgré ces nombreux
157
nombreuses revendications ont été évaluées de manière exhaustive pour leur protection anti-
activité microbienne.
L’une des difficultés pour les chercheurs dans ce domaine a été l’absence d’un seul
gle méthode validée et normalisée d’essai des extraits de plantes et, en général,
Les méthodes utilisées pour les tests in vitro de l'activité antimicrobienne ont été adoptées
les tests de produits pharmaceutiques conventionnels. Cela a plusieurs limites. pour l'examen-
Par exemple, contrairement aux produits pharmaceutiques conventionnels, les produits naturels sont des mélanges complexes de
des dizaines ou des centaines de composés qui peuvent ou non agir comme prévu dans le système d’essai.
tem. Ces constituants peuvent également avoir une solubilité limitée dans les milieux aqueux
est la base typique de nombreux essais. En outre, il n’existe pas de méthodes normalisées de
extraction ou distillation de produits, par conséquent, la composition exacte de
test peut être inconnu, certains chercheurs n’ayant pas accès à des fonds.
ou équipement pour effectuer la chromatographie en phase gazeuse - spectroscopie de masse (GC-MS)
et d’autres analyses chimiques des extraits qu’elles sont en train de filtrer
Les huiles essentielles présentent des difficultés supplémentaires en ce sens qu’elles peuvent interagir avec l’élimination.
plastiques de laboratoire, rendant l’utilisation des plastiques impossible. Par exemple, le
L’huile essentielle de Backhousia citriodora (citronnelle), originaire de Tralian, a une
du citral (environ 95% ou plus [11]) et un contact direct avec l'huile, ou un contact par
volatiles dans l’huile, peuvent transformer les plastiques de laboratoire standard en un gâchis collant (non publié).
observations). En conséquence, tous les dosages avec cette huile doivent être réalisés dans des équipements en verre.
ment - une dépense supplémentaire qui ajoute de manière significative les coûts d'analyse.
Une étude de la littérature publiée montre qu’il existe un certain nombre de
méthodes utilisées pour évaluer l'activité antimicrobienne; cependant, il n'y a personne
méthode qui est utilisée par tous les chercheurs et aucune étude approfondie pour déterminer
qui est la meilleure méthode pour les tests in vitro . Ce chapitre décrira les principaux
méthodes d’essai de l’activité antimicrobienne dans les extraits de plantes et met en évidence les
avantages et limites de chaque méthode. Bien que plusieurs plantes aient été identifiées
comme ayant une activité antibactérienne ou antifongique (par exemple, jus de canneberge, gousses d’ail),
Les extraits de plantes les plus largement utilisés pour une activité antibactérienne et antifongique sont les suivants:
huiles essentielles [12, 13], par conséquent, cette discussion s’appuie fortement sur la littérature des huiles essentielles.
Une considération importante dans cette discussion est le coût (financier et financier).
temps) et le besoin d’équipement spécialisé pour effectuer certaines analyses. Enquêtes
antimicrobienne des extraits de plantes, en particulier dans les premiers stades d’une enquête,
peut impliquer la sélection d’un grand nombre d’extraits et / ou d’un grand nombre de
des organismes, le dépistage peut également être nécessaire sur le terrain ou à l’emplacement
où les installations de laboratoire sont rudimentaires. Compte tenu de ces facteurs,
peut ne pas être une " meilleure " méthode, mais plutôt une sélection de bonnes méthodes, chacune correspondant
dans une autre circonstance.
Essais antibactériens
Le test in vitro le plus couramment utilisé pour les extraits de plantes est peut-être l'évaluation
antibactérienne, la majorité des chercheurs utilisant l’un des trois systèmes suivants:
essais suivants: diffusion sur disque, dilution sur gélose ou dilution / microdilution en bouillon. Celles-ci
158 8 Méthodes de test de l'activité antimicrobienne des extraits
les méthodes sont basées sur celles décrites pour les tests standardisés d'antibiotiques
[14 - 17]; Cependant, plusieurs facteurs peuvent affecter la pertinence de ces méthodes d'utilisation.
avec des extraits de plantes. Ces facteurs incluent le type d’organisme testé, la
centration de l'inoculum, le type de support (par exemple, IsoSensitest versus gélose nutritive) et
nature de l'extrait testé (pH, solubilité) [18 - 21]. Les méthodes peuvent être utilisées
simplement déterminer si une activité antibactérienne est présente ou non ou peut être utilisée
calculer une concentration minimale inhibitrice (CMI). Le tableau 8.1 résume les
limitations et avantages de ces différentes méthodes.
8.2 Essais antibactériens 159
Tableau 8.1 Comparaison des forces et des limites de divers tests d'activité antimicrobienne.
Méthode Points forts Limites
Essais antibactériens et antifongiques
Diffusion de puits de disques à faible coût Diffusion différentielle d'extrait
composants dus au partitionnement dans le
des milieux aqueux
Résultats disponibles dans 1 - 2 jours Taille de l'inoculum, présence d'agent solubilisant
agents et température d'incubation
peut affecter la zone d'inhibition
Ne nécessite pas de composés volatils spécialisés pouvant affecter
laboratoires de croissance bactérienne et fongique en milieu fermé
environnements
Utilise l'équipement et les données ne sont collectées qu'à un ou deux
réactifs facilement disponibles dans les points de temps
un laboratoire de microbiologie
Peut être effectué par la plupart
personnel de laboratoire
Grand nombre d'échantillons
peut être projeté
Les résultats sont quantifiables et
peut être comparé statistiquement
Dilution en gélose Des extraits hydrophobes peu coûteux peuvent se séparer
de l'agar
Ne nécessite pas d'inoculum spécialisé, présence de solubilisant
agents de laboratoire et la température d’incubation peuvent
affecter la zone d'inhibition
Utilise du matériel et des composés volatils pouvant affecter les bactéries
réactifs facilement disponibles et croissance fongique en milieu fermé
un laboratoire de microbiologie environnements
Peut être effectué par la plupart des données. Les données ne sont collectées qu'à un ou deux
points de temps du personnel de laboratoire
L’utilisation des systèmes de notation est ouverte à
subjectivité de l'observateur
Certains champignons poussent très lentement
160 8 Méthodes de test de l'activité antimicrobienne des extraits
Tableau 8.1 (suite)
Méthode Points forts Limites
Dilution en bouillon Permet de surveiller l'activité Les huiles essentielles peuvent ne pas rester en place
sur la durée de la solution pour la durée du test;
les émulsifiants et les solvants peuvent interférer
avec l'exactitude des résultats
Représentation plus précise Main d'œuvre et fastidieuse en série
des dilutions d’activité antibactérienne sont utilisées pour déterminer
compte
Les méthodes en micro-bouillon peuvent être Des extraits très colorés peuvent interférer
utilisé pour filtrer de grands nombres avec des points finaux colorimétriques dans
d'échantillons dans des méthodes de microbroth rentables
manière
CCM-bioautographie Fractionnement simultané Ne convient pas lorsque l'activité est due à
et détermination de la synergie des composants
bioactivité
Dépend de la méthode d'extraction et
Solvant de CCM utilisé
Les tests antiviraux permettent une évaluation simultanée - fastidieuse, coûteuse en temps et en temps
toxicité cellulaire avec
dosage antiviral
Peu de méthodes disponibles là-bas nécessite l'accès à la culture cellulaire et virale
comparabilité préalable entre les installations de confinement
les études sont élevées
Les huiles essentielles ne peuvent pas rester dans
solution pour la durée du test
Essais antiparasitaires Les méthodes sont bien documentées. Elles nécessitent beaucoup de travail, de temps et d’argent.
Certains tests permettent simultanément d’exiger l'accès à la culture cellulaire.
évaluation instantanée des installations cellulaires
toxicité
Les huiles essentielles ne peuvent pas rester dans
solution pour la durée du test
Les méthodes susmentionnées sont les plus largement utilisées pour les tests in vitro.
d’extraits de plantes à activité antibactérienne, d’autres méthodes ont également été utilisées.
Par exemple, Garedew et al. [22] font état de l’utilisation d’une méthode calorimétrique en flux pour
évaluer l’activité antibactérienne du miel et démontrer une meilleure sensibilité que les autres.
méthodes et Pitner et al. [23] proposent l’utilisation de systèmes à haut débit qui
mesurer la respiration bactérienne via un signal fluorescent. Cependant, le caractère pratique de
ces méthodes de criblage d'extraits de plantes doivent encore être déterminées. Une addition-
Procédé al - Chromatographie sur couche mince (CCM) - bioautographie - permet une identifica-
cation de fractions bioactives d’extraits au sein d’une seule analyse.
Les extraits de plantes sont obtenus par extraction aqueuse ou par solvant de fleurs, de racines ou de
feuillage ou peut être distillé, en tant qu'huile essentielle, à partir de matériel végétal; par conséquent, il y aura
être une gamme de solubilité et d’autres caractéristiques qui affectent le résultat du test. Celles-ci
les facteurs seront explorés dans les sections suivantes. Un groupe supplémentaire, le
Les sols (distillats aqueux) de diverses plantes ont également acquis la réputation d’avoir
activités antimicrobiennes, entre autres, [24]. Cependant, plusieurs études menées
dans notre laboratoire n’ont démontré aucune activité antimicrobienne chez ces plantes.
et n’ont donc pas été discutés plus avant
Résumé
L’utilisation d’extraits de plantes en tant qu’agents thérapeutiques suscite un intérêt croissant.
en particulier, la capacité de ces extraits à inhiber la croissance de micro-organismes pathogènes.
ganismes. Dans ce chapitre, les principales méthodes d’ évaluation in vitro des antimicrobiens
l'activité crobienne sont discutées et les forces et les limites de chaque méthode
a souligné. Méthodes d’évaluation des propriétés antibactériennes, antifongiques, antivirales et
antiparasitaires sont discutés avec des questions clés illustrées par la référence à la littérature
la température. L’objectif est de donner un aperçu des méthodes disponibles et de permettre à la
lecteur de choisir la méthode qui convient le mieux à leurs besoins.
Au cours de la dernière décennie, il y a eu une explosion d’intérêt pour les antimicrobiens,
en particulier antibactérien et antifongique, activité de produits naturels [1 - 5]. C'est
motivés par un certain nombre de facteurs, notamment l’augmentation de la résistance aux antibiotiques et la crainte de
développement encore plus infectieux « superbactéries, » l'impact des diseas- infectieux
sur la mortalité et la morbidité, et un intérêt croissant pour les thérapies « naturelles » et une
passer à plus de soins personnels. Les communautés traditionnelles souhaitent également conserver leur appartenance ethnique et ethnique.
patrimoine armacologique et exploration de traitements traditionnels pour une variété de
Facilité a le potentiel d'autonomiser ces communautés et d'améliorer à la fois leur
santé et économie. Ceci est particulièrement important dans les pays en développement où
l'utilisation d'antibiotiques conventionnels peut être limitée en raison de coûts ou d'autres facteurs. Dans
En outre, ces communautés ont souvent une riche tradition d'utilisation d'herbes et d'autres
produits végétaux pour les infections endémiques; cela sert de point de départ pour la recherche
intéressés à trouver des traitements pour ces maladies.
Recommandations pour l’utilisation de divers produits naturels (p. Ex. Huiles essentielles,
miel, extraits de plantes) pour les maladies infectieuses est répandu et apparaît dans
nombre de textes populaires et d’autres textes faciles à obtenir [6 - 10]. Cependant, malgré ces nombreux
157
nombreuses revendications ont été évaluées de manière exhaustive pour leur protection anti-
activité microbienne.
L’une des difficultés pour les chercheurs dans ce domaine a été l’absence d’un seul
gle méthode validée et normalisée d’essai des extraits de plantes et, en général,
Les méthodes utilisées pour les tests in vitro de l'activité antimicrobienne ont été adoptées
les tests de produits pharmaceutiques conventionnels. Cela a plusieurs limites. pour l'examen-
Par exemple, contrairement aux produits pharmaceutiques conventionnels, les produits naturels sont des mélanges complexes de
des dizaines ou des centaines de composés qui peuvent ou non agir comme prévu dans le système d’essai.
tem. Ces constituants peuvent également avoir une solubilité limitée dans les milieux aqueux
est la base typique de nombreux essais. En outre, il n’existe pas de méthodes normalisées de
extraction ou distillation de produits, par conséquent, la composition exacte de
test peut être inconnu, certains chercheurs n’ayant pas accès à des fonds.
ou équipement pour effectuer la chromatographie en phase gazeuse - spectroscopie de masse (GC-MS)
et d’autres analyses chimiques des extraits qu’elles sont en train de filtrer
Les huiles essentielles présentent des difficultés supplémentaires en ce sens qu’elles peuvent interagir avec l’élimination.
plastiques de laboratoire, rendant l’utilisation des plastiques impossible. Par exemple, le
L’huile essentielle de Backhousia citriodora (citronnelle), originaire de Tralian, a une
du citral (environ 95% ou plus [11]) et un contact direct avec l'huile, ou un contact par
volatiles dans l’huile, peuvent transformer les plastiques de laboratoire standard en un gâchis collant (non publié).
observations). En conséquence, tous les dosages avec cette huile doivent être réalisés dans des équipements en verre.
ment - une dépense supplémentaire qui ajoute de manière significative les coûts d'analyse.
Une étude de la littérature publiée montre qu’il existe un certain nombre de
méthodes utilisées pour évaluer l'activité antimicrobienne; cependant, il n'y a personne
méthode qui est utilisée par tous les chercheurs et aucune étude approfondie pour déterminer
qui est la meilleure méthode pour les tests in vitro . Ce chapitre décrira les principaux
méthodes d’essai de l’activité antimicrobienne dans les extraits de plantes et met en évidence les
avantages et limites de chaque méthode. Bien que plusieurs plantes aient été identifiées
comme ayant une activité antibactérienne ou antifongique (par exemple, jus de canneberge, gousses d’ail),
Les extraits de plantes les plus largement utilisés pour une activité antibactérienne et antifongique sont les suivants:
huiles essentielles [12, 13], par conséquent, cette discussion s’appuie fortement sur la littérature des huiles essentielles.
Une considération importante dans cette discussion est le coût (financier et financier).
temps) et le besoin d’équipement spécialisé pour effectuer certaines analyses. Enquêtes
antimicrobienne des extraits de plantes, en particulier dans les premiers stades d’une enquête,
peut impliquer la sélection d’un grand nombre d’extraits et / ou d’un grand nombre de
des organismes, le dépistage peut également être nécessaire sur le terrain ou à l’emplacement
où les installations de laboratoire sont rudimentaires. Compte tenu de ces facteurs,
peut ne pas être une " meilleure " méthode, mais plutôt une sélection de bonnes méthodes, chacune correspondant
dans une autre circonstance.
Essais antibactériens
Le test in vitro le plus couramment utilisé pour les extraits de plantes est peut-être l'évaluation
antibactérienne, la majorité des chercheurs utilisant l’un des trois systèmes suivants:
essais suivants: diffusion sur disque, dilution sur gélose ou dilution / microdilution en bouillon. Celles-ci
158 8 Méthodes de test de l'activité antimicrobienne des extraits
les méthodes sont basées sur celles décrites pour les tests standardisés d'antibiotiques
[14 - 17]; Cependant, plusieurs facteurs peuvent affecter la pertinence de ces méthodes d'utilisation.
avec des extraits de plantes. Ces facteurs incluent le type d’organisme testé, la
centration de l'inoculum, le type de support (par exemple, IsoSensitest versus gélose nutritive) et
nature de l'extrait testé (pH, solubilité) [18 - 21]. Les méthodes peuvent être utilisées
simplement déterminer si une activité antibactérienne est présente ou non ou peut être utilisée
calculer une concentration minimale inhibitrice (CMI). Le tableau 8.1 résume les
limitations et avantages de ces différentes méthodes.
8.2 Essais antibactériens 159
Tableau 8.1 Comparaison des forces et des limites de divers tests d'activité antimicrobienne.
Méthode Points forts Limites
Essais antibactériens et antifongiques
Diffusion de puits de disques à faible coût Diffusion différentielle d'extrait
composants dus au partitionnement dans le
des milieux aqueux
Résultats disponibles dans 1 - 2 jours Taille de l'inoculum, présence d'agent solubilisant
agents et température d'incubation
peut affecter la zone d'inhibition
Ne nécessite pas de composés volatils spécialisés pouvant affecter
laboratoires de croissance bactérienne et fongique en milieu fermé
environnements
Utilise l'équipement et les données ne sont collectées qu'à un ou deux
réactifs facilement disponibles dans les points de temps
un laboratoire de microbiologie
Peut être effectué par la plupart
personnel de laboratoire
Grand nombre d'échantillons
peut être projeté
Les résultats sont quantifiables et
peut être comparé statistiquement
Dilution en gélose Des extraits hydrophobes peu coûteux peuvent se séparer
de l'agar
Ne nécessite pas d'inoculum spécialisé, présence de solubilisant
agents de laboratoire et la température d’incubation peuvent
affecter la zone d'inhibition
Utilise du matériel et des composés volatils pouvant affecter les bactéries
réactifs facilement disponibles et croissance fongique en milieu fermé
un laboratoire de microbiologie environnements
Peut être effectué par la plupart des données. Les données ne sont collectées qu'à un ou deux
points de temps du personnel de laboratoire
L’utilisation des systèmes de notation est ouverte à
subjectivité de l'observateur
Certains champignons poussent très lentement
160 8 Méthodes de test de l'activité antimicrobienne des extraits
Tableau 8.1 (suite)
Méthode Points forts Limites
Dilution en bouillon Permet de surveiller l'activité Les huiles essentielles peuvent ne pas rester en place
sur la durée de la solution pour la durée du test;
les émulsifiants et les solvants peuvent interférer
avec l'exactitude des résultats
Représentation plus précise Main d'œuvre et fastidieuse en série
des dilutions d’activité antibactérienne sont utilisées pour déterminer
compte
Les méthodes en micro-bouillon peuvent être Des extraits très colorés peuvent interférer
utilisé pour filtrer de grands nombres avec des points finaux colorimétriques dans
d'échantillons dans des méthodes de microbroth rentables
manière
CCM-bioautographie Fractionnement simultané Ne convient pas lorsque l'activité est due à
et détermination de la synergie des composants
bioactivité
Dépend de la méthode d'extraction et
Solvant de CCM utilisé
Les tests antiviraux permettent une évaluation simultanée - fastidieuse, coûteuse en temps et en temps
toxicité cellulaire avec
dosage antiviral
Peu de méthodes disponibles là-bas nécessite l'accès à la culture cellulaire et virale
comparabilité préalable entre les installations de confinement
les études sont élevées
Les huiles essentielles ne peuvent pas rester dans
solution pour la durée du test
Essais antiparasitaires Les méthodes sont bien documentées. Elles nécessitent beaucoup de travail, de temps et d’argent.
Certains tests permettent simultanément d’exiger l'accès à la culture cellulaire.
évaluation instantanée des installations cellulaires
toxicité
Les huiles essentielles ne peuvent pas rester dans
solution pour la durée du test
Les méthodes susmentionnées sont les plus largement utilisées pour les tests in vitro.
d’extraits de plantes à activité antibactérienne, d’autres méthodes ont également été utilisées.
Par exemple, Garedew et al. [22] font état de l’utilisation d’une méthode calorimétrique en flux pour
évaluer l’activité antibactérienne du miel et démontrer une meilleure sensibilité que les autres.
méthodes et Pitner et al. [23] proposent l’utilisation de systèmes à haut débit qui
mesurer la respiration bactérienne via un signal fluorescent. Cependant, le caractère pratique de
ces méthodes de criblage d'extraits de plantes doivent encore être déterminées. Une addition-
Procédé al - Chromatographie sur couche mince (CCM) - bioautographie - permet une identifica-
cation de fractions bioactives d’extraits au sein d’une seule analyse.
Les extraits de plantes sont obtenus par extraction aqueuse ou par solvant de fleurs, de racines ou de
feuillage ou peut être distillé, en tant qu'huile essentielle, à partir de matériel végétal; par conséquent, il y aura
être une gamme de solubilité et d’autres caractéristiques qui affectent le résultat du test. Celles-ci
les facteurs seront explorés dans les sections suivantes. Un groupe supplémentaire, le
Les sols (distillats aqueux) de diverses plantes ont également acquis la réputation d’avoir
activités antimicrobiennes, entre autres, [24]. Cependant, plusieurs études menées
dans notre laboratoire n’ont démontré aucune activité antimicrobienne chez ces plantes.
et n’ont donc pas été discutés plus avant
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