Méthodes de substrat semi-solide
Les méthodes de diffusion sur disque et de dilution sur gélose utilisent des bactéries cultivées sur un solide
base d'agar pour tester l'activité antibactérienne. Ces méthodes sont relativement rapides, peu coûteuses
sive et ne nécessitent pas d’équipement de laboratoire sophistiqué; cependant, ils ne sont pas
sans inconvénients.
Méthode de diffusion sur disque
La méthode de diffusion sur disque (également appelée méthode de la zone d’inhibition) est probablement
La plus utilisée de toutes les méthodes utilisées pour tester l’activité antibactérienne. Il utilise
seulement de petites quantités de substance d'essai (10 - 30 μL ) peuvent être complétées par des recherches.
personnel ayant une formation minimale et, en tant que tel, peut être utile sur le terrain. le
procédé implique la préparation d'une boîte de Petri contenant 15 - 25 ml de gélose, des bactéries
à une concentration connue, sont ensuite réparties sur la surface de la gélose et laissées
tablish. Un disque en papier (6 ou 8 mm) contenant un volume connu de substance d'essai
est ensuite placé au centre de la gélose et la boîte incubée pendant 24 h ou plus. À
cette fois, la zone " effacée " (zone d'inhibition) entourant le disque est mesurée
et comparés aux zones pour les antibiotiques standard ou les valeurs de la littérature de
produits chimiques ou extraits similaires. Lorsque l'extrait est visqueux ou semi-solide (par exemple,
e) un puits peut être créé dans la gélose et la substance laissée se diffuser hors du
bien plutôt que loin d'un disque.
Les données de ces essais sont généralement présentées sous forme de taille moyenne de la zone d'inhibition.
(avec ou sans écart type), bien que certains auteurs utilisent un système de classement
Les symboles +, ++ et +++ indiquent les niveaux d’activité. Peu d’auteurs fournissent des statistiques
analyse théorique de leurs données et leurs niveaux d’activité (légère, modérée, forte) sont utilisés
sans aucune référence à des critères standardisés.
L’une des critiques majeures de cette méthode est qu’elle repose sur la capacité de
tract à diffuser à travers la gélose et tout composant de l'extrait qui diffuse
loin du disque créera un gradient de concentration, créant potentiellement un gra-
dient de composés antibactériens actifs. Toutes les méthodes de test antibactériennes
utiliser une base aqueuse pour la dispersion de la substance à tester, soit par diffusion dans
agar ou une dispersion dans un bouillon nutritif, par conséquent des dosages utilisant des extraits avec
La solubilité limitée dans les milieux aqueux (par exemple les huiles essentielles) peut ne pas refléter la réalité.
activité antibactérienne. Ceci a été étudié par Griffin [18] et Southwell et al.
8.2 Essais antibactériens 161
[27] qui ont démontré que beaucoup de terpénoïdes, en raison de leur faible solubilité dans l’eau
ne diffusera pas à travers les milieux aqueux et donc les huiles essentielles riches en ces
terpénoïdes (par exemple, linalol, acétate de linalyle, p- cymène) donneront un « faux » résultat
essais.
Il n’existe pas non plus de consensus sur la meilleure gélose à utiliser pour ces tests. Oxoid ' Iso- s
La gélose Sensitest est le support de choix pour le test de sensibilité aux antibiotiques conventionnel.
[14 - 16, 27], mais plusieurs auteurs ont noté que cela pourrait ne pas être le cas pour
extraits de plantes, en particulier huiles essentielles. Pauli et Kubeczka [28] ont découvert lors d'un test
eugénol, la taille de la zone variait en fonction de l’agar utilisé. Moon et al. [21] ont aussi
différences observées dans la zone d'inhibition entre IsoSensitest et le
gélose trient et ont également montré que ces différences ne sont pas cohérentes d’un pays à l’autre.
ganismes ou huiles essentielles utilisées. Smith et al. [29] ont constaté une sensibilité accrue (ie
(zones d’inhibition plus grandes)) lorsque l’agar nutritif, plutôt que l’infusion Difco dans le cerveau,
sion agar, a été utilisé pour une gamme d’extraits de plantes au méthanol. Ces auteurs ont également démontré
Onstruit que la taille de l’inoculum et la température d’incubation affectent également
taille de la zone. En effet, ces auteurs suggèrent que la densité d'inoculum est le plus simple
facteur important dans la variabilité de la taille de la zone.
Une autre limitation qui n’a pas été directement abordée dans la littérature, mais pour laquelle
la preuve existe, c’est la déduction dans le dosage des vapeurs libérées de l’expérience
tractus pendant l'incubation. Il est peu probable que ce soit un facteur important dans les solutions aqueuses ou aqueuses.
extraits de solvants, mais peut constituer un facteur de confusion important dans les dosages d’huiles essentielles. Dans-
ouye et al. [30] ont montré que les composants volatils des huiles essentielles peuvent avoir
une bonne activité antibactérienne; nous l'avons également démontré avec des huiles essentielles
parmi une gamme de plantes indigènes australiennes et de lavande. Il est possible que les résultats
des analyses antibactériennes effectuées à l'aide d'une boîte de Pétri fermée reflétera la combinaison
actions des composants du pétrole se diffusant à travers la gélose et l'exposition à des composants gazeux.
nents libérés de l'huile. Qui est responsable de la majorité des antibactériens
l’activité vitale n’a pas encore été déterminée.
Les méthodes de diffusion sur disque et de dilution sur gélose utilisent des bactéries cultivées sur un solide
base d'agar pour tester l'activité antibactérienne. Ces méthodes sont relativement rapides, peu coûteuses
sive et ne nécessitent pas d’équipement de laboratoire sophistiqué; cependant, ils ne sont pas
sans inconvénients.
Méthode de diffusion sur disque
La méthode de diffusion sur disque (également appelée méthode de la zone d’inhibition) est probablement
La plus utilisée de toutes les méthodes utilisées pour tester l’activité antibactérienne. Il utilise
seulement de petites quantités de substance d'essai (10 - 30 μL ) peuvent être complétées par des recherches.
personnel ayant une formation minimale et, en tant que tel, peut être utile sur le terrain. le
procédé implique la préparation d'une boîte de Petri contenant 15 - 25 ml de gélose, des bactéries
à une concentration connue, sont ensuite réparties sur la surface de la gélose et laissées
tablish. Un disque en papier (6 ou 8 mm) contenant un volume connu de substance d'essai
est ensuite placé au centre de la gélose et la boîte incubée pendant 24 h ou plus. À
cette fois, la zone " effacée " (zone d'inhibition) entourant le disque est mesurée
et comparés aux zones pour les antibiotiques standard ou les valeurs de la littérature de
produits chimiques ou extraits similaires. Lorsque l'extrait est visqueux ou semi-solide (par exemple,
e) un puits peut être créé dans la gélose et la substance laissée se diffuser hors du
bien plutôt que loin d'un disque.
Les données de ces essais sont généralement présentées sous forme de taille moyenne de la zone d'inhibition.
(avec ou sans écart type), bien que certains auteurs utilisent un système de classement
Les symboles +, ++ et +++ indiquent les niveaux d’activité. Peu d’auteurs fournissent des statistiques
analyse théorique de leurs données et leurs niveaux d’activité (légère, modérée, forte) sont utilisés
sans aucune référence à des critères standardisés.
L’une des critiques majeures de cette méthode est qu’elle repose sur la capacité de
tract à diffuser à travers la gélose et tout composant de l'extrait qui diffuse
loin du disque créera un gradient de concentration, créant potentiellement un gra-
dient de composés antibactériens actifs. Toutes les méthodes de test antibactériennes
utiliser une base aqueuse pour la dispersion de la substance à tester, soit par diffusion dans
agar ou une dispersion dans un bouillon nutritif, par conséquent des dosages utilisant des extraits avec
La solubilité limitée dans les milieux aqueux (par exemple les huiles essentielles) peut ne pas refléter la réalité.
activité antibactérienne. Ceci a été étudié par Griffin [18] et Southwell et al.
8.2 Essais antibactériens 161
[27] qui ont démontré que beaucoup de terpénoïdes, en raison de leur faible solubilité dans l’eau
ne diffusera pas à travers les milieux aqueux et donc les huiles essentielles riches en ces
terpénoïdes (par exemple, linalol, acétate de linalyle, p- cymène) donneront un « faux » résultat
essais.
Il n’existe pas non plus de consensus sur la meilleure gélose à utiliser pour ces tests. Oxoid ' Iso- s
La gélose Sensitest est le support de choix pour le test de sensibilité aux antibiotiques conventionnel.
[14 - 16, 27], mais plusieurs auteurs ont noté que cela pourrait ne pas être le cas pour
extraits de plantes, en particulier huiles essentielles. Pauli et Kubeczka [28] ont découvert lors d'un test
eugénol, la taille de la zone variait en fonction de l’agar utilisé. Moon et al. [21] ont aussi
différences observées dans la zone d'inhibition entre IsoSensitest et le
gélose trient et ont également montré que ces différences ne sont pas cohérentes d’un pays à l’autre.
ganismes ou huiles essentielles utilisées. Smith et al. [29] ont constaté une sensibilité accrue (ie
(zones d’inhibition plus grandes)) lorsque l’agar nutritif, plutôt que l’infusion Difco dans le cerveau,
sion agar, a été utilisé pour une gamme d’extraits de plantes au méthanol. Ces auteurs ont également démontré
Onstruit que la taille de l’inoculum et la température d’incubation affectent également
taille de la zone. En effet, ces auteurs suggèrent que la densité d'inoculum est le plus simple
facteur important dans la variabilité de la taille de la zone.
Une autre limitation qui n’a pas été directement abordée dans la littérature, mais pour laquelle
la preuve existe, c’est la déduction dans le dosage des vapeurs libérées de l’expérience
tractus pendant l'incubation. Il est peu probable que ce soit un facteur important dans les solutions aqueuses ou aqueuses.
extraits de solvants, mais peut constituer un facteur de confusion important dans les dosages d’huiles essentielles. Dans-
ouye et al. [30] ont montré que les composants volatils des huiles essentielles peuvent avoir
une bonne activité antibactérienne; nous l'avons également démontré avec des huiles essentielles
parmi une gamme de plantes indigènes australiennes et de lavande. Il est possible que les résultats
des analyses antibactériennes effectuées à l'aide d'une boîte de Pétri fermée reflétera la combinaison
actions des composants du pétrole se diffusant à travers la gélose et l'exposition à des composants gazeux.
nents libérés de l'huile. Qui est responsable de la majorité des antibactériens
l’activité vitale n’a pas encore été déterminée.
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