Méthodes de dilution du bouillon
Difficultés liées à la séparation des composés hydrophobes dans l’agar et désir de
surveiller plus précisément l’activité antibactérienne au fil du temps a entraîné une transition vers
méthodes de dilution en bouillon pour tester des extraits de plantes. Dans cette méthode, les bactéries sont
développé dans des éprouvettes dans un milieu liquide en présence de la substance d'essai. À la
tres intervalles de temps (par exemple toutes les 10 minutes ou toutes les heures), un échantillon est prélevé et le
numération bactérienne déterminée par dilution en série de l'échantillon, incubation ultérieure
sur gélose et dénombrement des unités formant des colonies. Contrairement au point de données unique
(par exemple, 24 h d’incubation) utilisés dans les tests de diffusion sur disque et de dilution sur gélose, le bouillon
méthode de dilution permet une évaluation beaucoup plus fine des événements antibactériens au fil du temps
et des caractéristiques telles que la récupération des effets de la substance à tester et la proportion
des organismes tués à un moment donné peut être déterminé. Cependant la méthode
demande également beaucoup de temps et de ressources et peut s'avérer peu pratique si un très grand nombre
Les substances testées doivent être examinées.
Comme pour d’autres méthodes d’essai, l’incorporation de composés hydrophobes et
les huiles essentielles dans le milieu aqueux est problématique, et comme il n'y a pas de phase solide à
piège ces composés, ils se séparent rapidement des médias et forment une couche
à travers la surface des médias. Pour les organismes sensibles à la tension en oxygène dans le
Ceci peut poser un problème supplémentaire car le pétrole peut inhiber les émanations gazeuses.
changement. Le tween ou l’éthanol peuvent être utilisés pour améliorer l’incorporation dans la solution aqueuse.
Cependant, comme indiqué précédemment, ces composés peuvent interférer avec le
résultats d'analyse. Les travaux de notre laboratoire ont montré que les huiles essentielles peuvent être conservées de manière stable.
8.2 Dosages antibactériens 163
incorporés dans un bouillon avec 0,02% de Tween-80 et les essais de dilution en bouillon sont
plus fiable et reproductible que la diffusion sur disque / puits ou la dilution en gélose
méthodes [20].
Des méthodes de micro-bouillon ont également été développées, qui utilisent des plaques de microtitration,
réduisant ainsi le volume d’extrait nécessaire et disposant de points de terminaison pouvant être déterminés.
spectrophotométrique, soit une mesure de la turbidité, soit l’utilisation de la viabilité cellulaire
indicateur (par exemple, résazurine, méthylthiazoldiphényltétrazolium (MTT)) [33]. Mann
et Markham [33] proposent que l’indicateur de viabilité cellulaire soit la meilleure méthode de
détermination du point final pour les huiles essentielles, car l'interface huile / eau peut interférer
avec des mesures de turbidité. Bien que ces méthodes de micro-bouillon fonctionnent généralement bien pour
extraits de plantes, des problèmes se posent lorsque l’extrait est fortement coloré, ce qui peut
se familiariser avec la mesure du produit chimique indicateur. En outre, comme ces méthodes
utiliser des plaques de microtitration en plastique, des huiles essentielles ayant une action dissolvante sur les plastiques (par exemple:
Letospermum petersonii , Backhousia citriodora ) ne peuvent pas être utilisés. Nous avons également
que l’ajout d’huiles essentielles au support modifie son pH, ce qui peut entraîner
contribuer à l'activité antibactérienne observée [19]; cela pourrait être prévu
plus significatif dans les petits volumes, par exemple dans la méthode du micro-bouillon.
On ignore si d'autres extraits de plantes auront également un effet. Micro-bouillon
les méthodes sont également moins gourmandes en temps et en ressources que les autres méthodes en bouillon
la nécessité de multiples dilutions en série pour déterminer le nombre de bactéries est éliminée.
Difficultés liées à la séparation des composés hydrophobes dans l’agar et désir de
surveiller plus précisément l’activité antibactérienne au fil du temps a entraîné une transition vers
méthodes de dilution en bouillon pour tester des extraits de plantes. Dans cette méthode, les bactéries sont
développé dans des éprouvettes dans un milieu liquide en présence de la substance d'essai. À la
tres intervalles de temps (par exemple toutes les 10 minutes ou toutes les heures), un échantillon est prélevé et le
numération bactérienne déterminée par dilution en série de l'échantillon, incubation ultérieure
sur gélose et dénombrement des unités formant des colonies. Contrairement au point de données unique
(par exemple, 24 h d’incubation) utilisés dans les tests de diffusion sur disque et de dilution sur gélose, le bouillon
méthode de dilution permet une évaluation beaucoup plus fine des événements antibactériens au fil du temps
et des caractéristiques telles que la récupération des effets de la substance à tester et la proportion
des organismes tués à un moment donné peut être déterminé. Cependant la méthode
demande également beaucoup de temps et de ressources et peut s'avérer peu pratique si un très grand nombre
Les substances testées doivent être examinées.
Comme pour d’autres méthodes d’essai, l’incorporation de composés hydrophobes et
les huiles essentielles dans le milieu aqueux est problématique, et comme il n'y a pas de phase solide à
piège ces composés, ils se séparent rapidement des médias et forment une couche
à travers la surface des médias. Pour les organismes sensibles à la tension en oxygène dans le
Ceci peut poser un problème supplémentaire car le pétrole peut inhiber les émanations gazeuses.
changement. Le tween ou l’éthanol peuvent être utilisés pour améliorer l’incorporation dans la solution aqueuse.
Cependant, comme indiqué précédemment, ces composés peuvent interférer avec le
résultats d'analyse. Les travaux de notre laboratoire ont montré que les huiles essentielles peuvent être conservées de manière stable.
8.2 Dosages antibactériens 163
incorporés dans un bouillon avec 0,02% de Tween-80 et les essais de dilution en bouillon sont
plus fiable et reproductible que la diffusion sur disque / puits ou la dilution en gélose
méthodes [20].
Des méthodes de micro-bouillon ont également été développées, qui utilisent des plaques de microtitration,
réduisant ainsi le volume d’extrait nécessaire et disposant de points de terminaison pouvant être déterminés.
spectrophotométrique, soit une mesure de la turbidité, soit l’utilisation de la viabilité cellulaire
indicateur (par exemple, résazurine, méthylthiazoldiphényltétrazolium (MTT)) [33]. Mann
et Markham [33] proposent que l’indicateur de viabilité cellulaire soit la meilleure méthode de
détermination du point final pour les huiles essentielles, car l'interface huile / eau peut interférer
avec des mesures de turbidité. Bien que ces méthodes de micro-bouillon fonctionnent généralement bien pour
extraits de plantes, des problèmes se posent lorsque l’extrait est fortement coloré, ce qui peut
se familiariser avec la mesure du produit chimique indicateur. En outre, comme ces méthodes
utiliser des plaques de microtitration en plastique, des huiles essentielles ayant une action dissolvante sur les plastiques (par exemple:
Letospermum petersonii , Backhousia citriodora ) ne peuvent pas être utilisés. Nous avons également
que l’ajout d’huiles essentielles au support modifie son pH, ce qui peut entraîner
contribuer à l'activité antibactérienne observée [19]; cela pourrait être prévu
plus significatif dans les petits volumes, par exemple dans la méthode du micro-bouillon.
On ignore si d'autres extraits de plantes auront également un effet. Micro-bouillon
les méthodes sont également moins gourmandes en temps et en ressources que les autres méthodes en bouillon
la nécessité de multiples dilutions en série pour déterminer le nombre de bactéries est éliminée.
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