Isolement des phytoalexines et des phytoncides
Sophoraflavanone G (2 ( S ) -5,7,2 ′, 4 -tétrahydroxy-8-lavandulyflavanone) isolée
de Sophora spp. (Leguminosae) a été utilisé dans le test d’activité anti-MRSA [21].
Calozeyloxanthone a été isolé de l'écorce de racine de Callophyllum moonii sous forme de
composé cristallin jaune (chromatographie sur couche mince (TLC), mono-tache, fusion
point de fusion 236 - 237 ° C). Il a été identifié à partir du matériel végétal collecté à
Forêt de Kanneliya dans la province méridionale du Sri Lanka. Les spécimens de plantes ont été
comparés avec des spécimens d’herbier (spécimen n ° 24994) au Royal Botanic
Jardins, Peradeniya, Sri Lanka et un spécimen de référence a été déposé à la
laboratoires de produits uraux de l’Institut d’études fondamentales [22].
-Mangostin a été isolée comme suit. L’écorce de la tige de G. mangostana L. (1 kg) a été
séché, réduit en poudre et extrait avec de l'hexane, du chlorure de méthylène et du méthanol,
respectivement. Chromatographie sur colonne de gel de silice (taille de particules Fluka 6074,1
7.5 Isolement des phytoalexines et des phytoncides 141
0,063 ~ 0,2 mm avec l’hexane, le chlorure de méthylène et le méthanol comme solvants) du
l’extrait d’hexane (11,9 g) et l’extrait de chlorure de méthylène (25 g) ont donné deux principaux
livres: -mangostine (11,6 g, 1,16%) et â -mangostine (6,4 g, 0,64%) en jaune
des aiguilles. Ces structures ont été confirmées par comparaison directe avec des
échantillons et données spectrales [23].
Les oligomères de stilbène (gnémonol B et génétine E) isolés à partir de gnetacées
le Dr M. Iinuma (Université pharmaceutique de Gifu) a fait don de ces plantes
[24, 25].
Concentration minimale inhibitrice
Les valeurs de CMI ont été déterminées par la méthode de dilution en gélose de la Société japonaise.
chimiothérapie [26] utilisant un micro-inoculateur (Sakuma Seisakusho Co., Ltd., To-
kyo). La CMI des cinq souches d’ERV et de trois souches d’ESV décrites ci-dessus a été analysée.
mesurées à 250, 32, 200, 200 et 16 μ g mL - 1 , tandis que les valeurs de CMI des neuf
souches de SARM et de trois souches de méthicilline ont été mesurées à 12,5, 400, 25,
Respectivement 12,5, 400, 1600, 25, 12,5 et 400 μ g mL - 1 [27].
7.7
Synergisme De Composés Antibactériens Avec Des Antibiotiques Disponibles Dans Le Commerce
Les composés antimicrobiens ont été préparés dans une solution à 50% de diméthylsulfoxyde. Un so-
lution de phytoalexine (ou phytoncide) en association avec les antibiotiques correspondants
a été préparée selon la méthode de la dilution par double avec de l’eau stérilisée et chaque solution
été versé dans des boîtes de Pétri en plastique stérilisées séparément. Agar MH stérilisé
8 ml (gélose MH versée dans la phytoalexine (ou phytoncide) seule ou l’antibiotique
seul) a été versé dans les boîtes de Pétri ci-dessus et mélangé. Après refroidissement, le micro
phytoalexine ou phytoncide seule, les antibiotiques seuls et leurs combinaisons.
ont été examinées. Les indices de concentration inhibitrice de fraction (FIC) ont été calculés.
calculé par la méthode de Didry et al. [28], et les effets interactifs de la phytoa-
le lexin ou phytoncide et les antibiotiques commerciaux ont été examinés.
Les valeurs de l'indice FIC ont été jugées comme suit: indice FIC ≤0,5: effet synergique; FIC
indice 0,5 - 1,0: effet partiellement synergique; Indice FIC> 1,0: pas d'effet synergique; FIC
indice ≥2,0: effet antagoniste.
142 7 Activités anti-SARM et anti-ERV de phytoalexines et de phytoncides isolés de plantes tropicales
7,8
Activités antibactériennes
Sophoraflavanone G
Les valeurs de CMI de la sophoraflavanone G contre 27 souches de SARM sont présentées dans
Tableau 7.1. Les valeurs allaient de 3,13 à 6,25 μg mL - 1 .
7.8 Activités antibactériennes 143
Tableau 7.1 Activités antibactériennes de la sophoraflavanone G (SFG) contre 27 souches
Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline (SARM).
Strain no. Valeurs MIC de type coagulase en méthicilline MIC pour SFG
μg mL –1 ) (μg mL –1 )
1 [a] II 1600 6,25
2 [a] II 100 6,25
3 II 1600 6,25
4 II 1600 6,25
5 VII 3200 6,25
6 II 1600 6,25
7 II 1600 6,25
8 II 3200 3.12
9 VII 800 3.12
10 [a] II 400 3.12
11 [a] II 800 3.12
12 III 12,5 6,25
13 II 400 6,25
14 III 12,5 6,25
15 VII 12,5 6,25
16 II 400 6,25
17 II 50 6,25
18 II 400 6,25
19 [a] II 400 3.12
20 [a] II 800 6,25
21 II 400 6,25
22 II 400 6,25
23 II 800 6,25
24 II 1600 3.12
25 II 800 3.12
26 II 800 6,25
27 II 400 6,25
Strain nos 1 - 9: SARM isole Osaka Medical Center pour les maladies cardio - vasculaires et le cancer.
De souche 11 - 19: SARM isole de l' hôpital national d' Osaka.
Souche nos 19 - 27: Isolements à SARM de l’hôpital Kitano.
a Ces souches ont été utilisées pour le test de synergie.
7.8.2
Calozeyloxanthone
Les valeurs de CMI de calozeyloxanthone pour chacune des deux souches d’ERV et de
VSE sont présentés dans le tableau 7.2. L'activité antibactérienne de calozeyloxanthone contre
VRE et VSE était forte et les valeurs de CMI observées étaient de 6,25 μ g ml - 1 et
12,5 μ g mL - 1 , respectivement.
144 7 Activités anti-SARM et anti-ERV de phytoalexines et de phytoncides isolés de plantes tropicales
Tableau 7.2 Activité antibactérienne de la calozeyloxanthone contre deux souches de vancomycine résistantes
les entérocoques (ERV) et les entérocoques sensibles à la vancomycine (ERV).
MIC (μg mL –1 )
Calozeyloxanthone Gentamicin
Enterococcus faecalis ATCC 51575 (ERV) 12.5 400
Enterococcus faecium ATCC 51559 (ERV) 6,25 25
Enterococcus faecalis ATCC 12953 (VSE) 12.5 12.5
Enterococcus faecalis ATCC 8459 (VSE) 6,25 6,25
CMI, concentration minimale inhibitrice.
7.8.3
-Mangostin
Le tableau 7.3 présente l'activité anti-VRE de -mangostin et â -mangostin, et le tableau
7.4 montre l'activité anti-SARM de -mangostin et â -mangostin, respectivement.
-Mangostin s'est avéré actif contre cinq souches d'ERV et neuf souches
MRSA, avec des valeurs de CMI allant de 6,25 à 12,5 μg mL - 1 , respectivement.
Tableau 7.3 Valeurs CMI de la et de la â- mangostine mangostine contre cinq souches de
entérocoques résistants à la vancomycine (ERV) et trois souches d’entérocoques sensibles à la vancomycine
(VSE).
MIC (μg mL –1 )
-Mangostin â -Mangostin Gentamicin
Enterococcus faecalis ATCC 51299 (ERV) [a] 3.13 25> 100
Enterococcus faecalis ATCC 51575 (ERV) [a] 3.13 25> 100
Enterococcus faecium ATCC 51559 (ERV) [a] 3.13 25 6.25
Enterococcus faecium KIHC-237 (VRE) [b] 3.13 25 6.25
Enterococcus gallinarum KIHC-241 (VRE) [b] 6,25 25 3,13
Enterococcus faecalis IFO 12965 (VSE) [c] 6,25 25 12,5
Enterococcus faecium IFO 3535 (VSE) [c] 3.13 25 6.25
Enterococcus faecalis ATCC 8459 (VSE) [c] 3.13 25 6.25
CMI, concentration minimale inhibitrice.
a Acheté à American Type Culture Collection (ATCC).
b Fourni par l'Institut de santé publique de Kobe.
c Acheté auprès de l’Institut de fermentation d’Osaka (IFO), Japon.
7.8.4
Gnemonol B et Gnetin E
Les tableaux 7.5 et 7.6 montrent les valeurs de MIC de gnémonol B et de gnetin E contre les ERV,
SARM, VSE et MSSA.
7.8 Activités antibactériennes 145
Tableau 7.4 valeurs de CMI de -mangostin et â -mangostin contre neuf souches de methicillinresistant
S. aureus (MRSA) et trois souches de S. aureus sensible à la méthicilline (MSSA).
MIC (μg mL –1 )
-Mangostin â -Mangostin Gentamicin
SARM-1 [a] 6,25> 100 25
SARM-2 [a] 6,25> 100 3,13
SARM-3 [a] 6,25> 100 1,56
SARM-4 [b] 6,25> 100 3,13
SARM-5 [b] 6,25> 100 6,25
SARM-6 [b] 6,25> 100 0,2
SARM-7 [c] 6,25> 100 0,2
SARM-8 [c] 12,5> 100 6,25
SARM-9 [c] 6,25> 100> 100
MSSA 1 ( S. aureus IFO 13276) [d] 6,25> 100 0,2
MSSA 2 ( S. aureus IFO 12732) [d] 6,25> 100 0,2
MSSA 3 ( S. aureus IFO 3080) [d] 6,25> 100 0,2
CMI, concentration minimale inhibitrice.
un don du Centre médical d'Osaka pour le cancer et les maladies cardiovasculaires, Japon.
b Don de l'Hôpital national d'Osaka, au Japon.
c Don de l'hôpital Kitano, Japon.
d Acheté auprès de l’Institut de fermentation d’Osaka (IFO), Japon.
Tableau 7.5 Valeurs CMI du gnémonol B et de la gnetine E contre cinq souches de virus résistant à la vancomycine
entérocoques (ERV) et trois souches d’entérocoques sensibles à la vancomycine (ESV).
MIC (μg mL –1 )
Gnémonol B Gnetin E Gentamicin
Enterococcus faecalis ATCC 51299 (ERV) [a] 12.5 12.5> 100
Enterococcus faecalis ATCC 51575 (ERV) [a] 12.5 12.5> 100
Enterococcus faecium ATCC 51559 (ERV) [a] 12,5 12,5 6,25
Enterococcus faecium KIHC-237 (VRE) [b] 12,5 25 6,25
Enterococcus gallinarum KIHC-241 (VRE) [b] 12,5 25 3,13
Enterococcus faecalis IFO 12965 (VSE) [c] 12,5 25 12,5
Enterococcus faecium IFO 3535 (VSE) [c] 12,5 25 6,25
Enterococcus faecalis ATCC 8459 (VSE) [c] 12,5 25 6,25
CMI, concentration minimale inhibitrice.
a Acheté à American Type Culture Collection (ATCC).
b Fourni par l'Institut de santé publique de Kobe.
c Acheté auprès de l’Institut de fermentation d’Osaka (IFO), Japon.
Gnemonol B s'est révélé actif contre cinq souches d'ERV et neuf souches
de SARM avec des valeurs de CMI de 12,5 et 6,25 μg mL - 1 , respectivement. Gnemonol B était
également actif contre les trois souches de VSE et MSSA avec des valeurs de CMI de 12,5 et
6,25 μg mL - 1 , respectivement. Gnetin E a également présenté des activités contre cinq souches de
ERV, neuf souches de MRSA et trois souches de VSE et MSSA avec valeurs de CMI
allant de 12,5 à 25 μg mL - 1 .
7.8.5
Résumé des valeurs MIC de la phytoalexine et du phytoncide contre le SARM et les ERV
Les valeurs CMI de la phytoalexine et du phytoncide contre SARM et les ERV sont sommaires.
marized dans les tableaux 7.7 et 7.8.
146 7 Activités anti-SARM et anti-ERV de phytoalexines et de phytoncides isolés de plantes tropicales
Tableau 7.6 Valeurs de CMI du gnémonol B et de la gnetine E contre neuf souches de méthicilline résistantes
S. aureus (MRSA) et trois souches de S. aureus sensible à la méthicilline (MSSA).
MIC (μg mL –1 )
Gnémonol B Gnetin E Gentamicin
SARM-1 [a] 6,25 12,5 25
SARM-2 [a] 6,25 12,5 3,13
SARM-3 [a] 6,25 25 1,56
SARM-4 [b] 6,25 12,5 3,13
SARM-5 [b] 6,25 12,5 6,25
SARM-6 [b] 6,25 12,5 0,2
SARM-7 [c] 6,25 12,5 0,2
SARM-8 [c] 6,25 25 6,25
SARM-9 [c] 6,25 25> 100
MSSA 1 ( S. aureus IFO 13276) [d] 6,25 12,5 0,2
MSSA 2 ( S. aureus IFO 12732) [d] 6,25 12,5 0,2
MSSA 3 ( S. aureus IFO 3080) [d] 6,25 12,5 0,2
CMI, concentration minimale inhibitrice.
un don du Centre médical d'Osaka pour le cancer et les maladies cardiovasculaires, Japon.
b Don de l'Hôpital national d'Osaka, au Japon.
c Don de l'hôpital Kitano, Japon.
d Acheté auprès de l’Institut de fermentation d’Osaka (IFO), Japon.
Tableau 7.7 Activités anti-ERV de la sophoraflavanone G, calozeyloxanthone,
-mangostine et de stilbène.
MIC (μg mL –1 )
Sophoraflavanone G 6.25 - 12.5
Calozeyloxanthone 6,25 - 12,5
-Mangostin 3.13 - 6.25
Gnemonol B 12.5
Gnetin E 12.5 - 25
Gentamicin 6.25 - 400
CMI, concentration minimale inhibitrice.
La Sophoraflavanone G, la calozeyloxanthone et la -mangostine possédaient une forte
SARM et activités anti-ERV comparés à la gentamicine. Les oligomères de stilbène (gnem-
onol B et gnetin E) possédaient également des activités anti-SARM et anti-ERV, mais ils étaient
plus faible que ceux de sophoraflavanone G, calozeyloxanthone et -mangostin.
7.9
Synergie entre les composés à tester et les antibiotiques commerciaux contre l’ERV,
SARM, VSE et MSSA
7.9.1
Sophoraflavanone G
Synergie entre la sophoraflavanone G et le chlorhydrate de vancomycine ou de fos-
de la fomycine a été observée (les indices de FIC étaient de 0,16 et 0,48), tandis que la synergie partielle
a été observé entre la sophoraflavanone G et d’autres agents antibactériens tels que l’amidon
picilline, gentamicine et minocycline (les indices FIC étaient de 0,73, 0,69 et 0,65, re-
de manière spectrale) (Fig. 7.5).
7.9 Synergie entre les composés à tester et les antibiotiques commerciaux 147
Tableau 7.8 Activités anti-SARM de la sophoraflavanone G, du calozeyloxanthone,
-mangostine et de stilbène.
MIC (μg mL –1 )
Sophoraflavanone G 3.13 - 6.25
-Mangostin 6,25 - 12,5
Gnémonol B 6.25
Gnetin E 12.5 - 25
Gentamicine 1,56 - 100
CMI, concentration minimale inhibitrice.
Fig. 7.5 Synergismes entre la sophoraflavanone G et des antibiotiques disponibles dans le commerce.
FIC, concentration inhibitrice de fraction; ABPC, ampicilline; OGM, gentamicine; MINO, minocycline;
FOM, fosfomycine; VCM, vancomycine; SARM, Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline .
7.9.2

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