Essais antifongiques
Des dosages antifongiques sont régulièrement utilisés pour déterminer si des extraits de plantes auront
possibilité de traiter des infections fongiques humaines (par exemple, la teigne) ou d’être utilisées en agriculture.
applications réelles / horticoles. En général, ces tests sont rapides, peu coûteux et ne
ne pas impliquer l'accès à du matériel spécialisé. Activité des extraits de plantes contre le
candida de levure est généralement évalué à l’aide des méthodes de diffusion sur disque ou par puits.
ci-dessus, et de nombreuses études rapportent une activité anti-candida avec une activité antibactérienne.
l’activité contre les champignons pour cette raison (voir, par exemple, les références
[45 - 48]). L’activité contre les champignons filamenteux peut être évaluée en diffusion de puits, en gélose
dilution et méthodes bouillon / micro-bouillon avec beaucoup des mêmes limitations et
avantages décrits précédemment pour les dosages antibactériens [49, 50].
Lorsque les techniques de diffusion de puits et de disque sont utilisées, les bouchons fongiques sont
retiré d'une colonie en croissance active et placé à une distance prédéterminée
(généralement à 2 cm) du centre d’un plat en gélose. Un puits s'ennuie alors au centre
de la gélose et de la substance d'essai ajoutées au puits, ou bien la substance d'essai est ajoutée à
disque de papier et le disque placé au centre de la gélose. (L'agar spécifique à être
ainsi que la température et le temps d’incubation seront déterminés par les champignons pour
être utilisé.) La croissance des champignons est contrôlée et toute inhibition de mycélium
croissance notée. Cette inhibition de la croissance est ensuite exprimée en pourcentage de la
croissance des colonies témoins. Dans la méthode de dilution en agar (également connu sous le nom de poison
technique alimentaire), la substance d’essai est incorporée au substrat de gélose puis
un échantillon de champignon en croissance active est placé au centre de la plaque. Le radial
croissance du champignon après un temps approprié, en fonction des caractéristiques de croissance
caractéristiques du champignon, est ensuite mesurée et comparée aux échantillons de contrôle.
Sridhar et al. [44] a utilisé cette méthode pour montrer l'activité des huiles essentielles contre
gamme de champignons d'importance agricole et médicale.
En variante, une suspension de cellules fongiques peut être ensemencée sur la plaque et le
CMI déterminée par la plus faible concentration de substance d'essai évitant le visible
croissance fongique [51]. L’activité antisporulation peut être évaluée en utilisant des scanners électriques.
microscopie tronquée [52], tandis que les effets sur la germination des conidies peuvent être évalués par
exposer les conidies à la substance à tester et compter ensuite le nombre
de conidies avec des tubes germinaux égaux à 1 - 1,5 fois la longueur de la conidie [53]. Additionnel
observations de conidies germées sur une période donnée permettront également d’évaluer
l'effet de l'extrait de plante sur la croissance du tube germinatif.
Inouye et ses collaborateurs ont étudié la susceptibilité des champignons à plusieurs espèces.
huiles essentielles et ont montré que les valeurs de MIC peuvent être calculées en utilisant une gamme de
méthodes [50, 52, 54, 55]. Plus important encore, ils ont montré que lorsque les tests sont
réalisés dans des conditions fermées (c’est-à-dire que la boîte de Pétri est scellée), les MIC sont
légèrement inférieure à celle pratiquée à l’air libre [50]. L'action de l'essentiel
la volatilité des extraits de plantes et d’extraits de plantes sur la croissance fongique a été démontrée
de champignons [55 - 57] et a des implications importantes pour la sélection d'extraits de plantes
pour l'activité antifongique. Les résultats de ces essais dépendront non seulement de la résistance antifunique
gale induite par le contact direct avec la substance à tester, mais également sur la
8.3 Essais antifongiques 165
la chambre d’expérimentation et si elle est ouverte ou fermée (et donc la
présence et concentration d'extrait ou d'huile volatiles). La méthode d'évaluation
l’activité antifongique des extraits volatils est simple et implique la place-
disque de papier contenant la substance à tester sur le couvercle inversé d’une boîte de Pétri et
évaluation séquentielle de la croissance fongique; cependant, cela est rarement pris en compte dans la lutte antifongique.
tests de dépistage de gal. Compte tenu de l’impact que les substances volatiles peuvent avoir sur la croissance fongique, il
il est recommandé de l'inclure comme élément standard de l'évaluation antifongique
d'extraits de plantes.
Inouye et al. [50] ont également montré que l'inclusion de Tween-80 avait pour résultat une
la bioactivité dans les tests de dilution sur gélose et la taille de l’inoculum fongique initial avaient
un effet significatif, les plus grands inoculums étant plus résistants aux effets antifongiques.
les insectes. Shahi et al. [58] dans leur étude de l'activité antifongique des huiles essentielles trouvées
que la réponse antifongique a été modifiée en modifiant le pH de la croissance fongique
médias. Lorsque le pH du milieu devient plus alcalin, les huiles essentielles d’eucalyptus ont un
effet inhibiteur accru sur les champignons ( Trichophyton spp., Microsporum spp et Epi -
dermophyton spp.).
Des dosages antifongiques sont régulièrement utilisés pour déterminer si des extraits de plantes auront
possibilité de traiter des infections fongiques humaines (par exemple, la teigne) ou d’être utilisées en agriculture.
applications réelles / horticoles. En général, ces tests sont rapides, peu coûteux et ne
ne pas impliquer l'accès à du matériel spécialisé. Activité des extraits de plantes contre le
candida de levure est généralement évalué à l’aide des méthodes de diffusion sur disque ou par puits.
ci-dessus, et de nombreuses études rapportent une activité anti-candida avec une activité antibactérienne.
l’activité contre les champignons pour cette raison (voir, par exemple, les références
[45 - 48]). L’activité contre les champignons filamenteux peut être évaluée en diffusion de puits, en gélose
dilution et méthodes bouillon / micro-bouillon avec beaucoup des mêmes limitations et
avantages décrits précédemment pour les dosages antibactériens [49, 50].
Lorsque les techniques de diffusion de puits et de disque sont utilisées, les bouchons fongiques sont
retiré d'une colonie en croissance active et placé à une distance prédéterminée
(généralement à 2 cm) du centre d’un plat en gélose. Un puits s'ennuie alors au centre
de la gélose et de la substance d'essai ajoutées au puits, ou bien la substance d'essai est ajoutée à
disque de papier et le disque placé au centre de la gélose. (L'agar spécifique à être
ainsi que la température et le temps d’incubation seront déterminés par les champignons pour
être utilisé.) La croissance des champignons est contrôlée et toute inhibition de mycélium
croissance notée. Cette inhibition de la croissance est ensuite exprimée en pourcentage de la
croissance des colonies témoins. Dans la méthode de dilution en agar (également connu sous le nom de poison
technique alimentaire), la substance d’essai est incorporée au substrat de gélose puis
un échantillon de champignon en croissance active est placé au centre de la plaque. Le radial
croissance du champignon après un temps approprié, en fonction des caractéristiques de croissance
caractéristiques du champignon, est ensuite mesurée et comparée aux échantillons de contrôle.
Sridhar et al. [44] a utilisé cette méthode pour montrer l'activité des huiles essentielles contre
gamme de champignons d'importance agricole et médicale.
En variante, une suspension de cellules fongiques peut être ensemencée sur la plaque et le
CMI déterminée par la plus faible concentration de substance d'essai évitant le visible
croissance fongique [51]. L’activité antisporulation peut être évaluée en utilisant des scanners électriques.
microscopie tronquée [52], tandis que les effets sur la germination des conidies peuvent être évalués par
exposer les conidies à la substance à tester et compter ensuite le nombre
de conidies avec des tubes germinaux égaux à 1 - 1,5 fois la longueur de la conidie [53]. Additionnel
observations de conidies germées sur une période donnée permettront également d’évaluer
l'effet de l'extrait de plante sur la croissance du tube germinatif.
Inouye et ses collaborateurs ont étudié la susceptibilité des champignons à plusieurs espèces.
huiles essentielles et ont montré que les valeurs de MIC peuvent être calculées en utilisant une gamme de
méthodes [50, 52, 54, 55]. Plus important encore, ils ont montré que lorsque les tests sont
réalisés dans des conditions fermées (c’est-à-dire que la boîte de Pétri est scellée), les MIC sont
légèrement inférieure à celle pratiquée à l’air libre [50]. L'action de l'essentiel
la volatilité des extraits de plantes et d’extraits de plantes sur la croissance fongique a été démontrée
de champignons [55 - 57] et a des implications importantes pour la sélection d'extraits de plantes
pour l'activité antifongique. Les résultats de ces essais dépendront non seulement de la résistance antifunique
gale induite par le contact direct avec la substance à tester, mais également sur la
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la chambre d’expérimentation et si elle est ouverte ou fermée (et donc la
présence et concentration d'extrait ou d'huile volatiles). La méthode d'évaluation
l’activité antifongique des extraits volatils est simple et implique la place-
disque de papier contenant la substance à tester sur le couvercle inversé d’une boîte de Pétri et
évaluation séquentielle de la croissance fongique; cependant, cela est rarement pris en compte dans la lutte antifongique.
tests de dépistage de gal. Compte tenu de l’impact que les substances volatiles peuvent avoir sur la croissance fongique, il
il est recommandé de l'inclure comme élément standard de l'évaluation antifongique
d'extraits de plantes.
Inouye et al. [50] ont également montré que l'inclusion de Tween-80 avait pour résultat une
la bioactivité dans les tests de dilution sur gélose et la taille de l’inoculum fongique initial avaient
un effet significatif, les plus grands inoculums étant plus résistants aux effets antifongiques.
les insectes. Shahi et al. [58] dans leur étude de l'activité antifongique des huiles essentielles trouvées
que la réponse antifongique a été modifiée en modifiant le pH de la croissance fongique
médias. Lorsque le pH du milieu devient plus alcalin, les huiles essentielles d’eucalyptus ont un
effet inhibiteur accru sur les champignons ( Trichophyton spp., Microsporum spp et Epi -
dermophyton spp.).
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